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      无菌室内进行RPMI1640完全培养基制备时的准备工作有哪些?

      发布时间:2021/7/21 9:50:15      阅读次数:164

        RPMI1640完全培养基(含胎牛血清15%)的产品特点:三次无菌过滤,辐射灭菌,批次新,保质期久,贴壁效果好,增殖效率高。起初是为淋巴细胞培养专门设计的,其含有多类细胞培养所需的氨基酸、维生素、无机盐等多种成分,但不含蛋白质、脂类或者任何生长因子,需搭配血清和无血清添加物使用。
        RPMI全称为Roswell Park Memorial Institute,指的是洛斯维·帕克纪念研究所。RPMI是这个研究所研发的一类细胞培养基,1640是培养基代号。RPMI-1640培养基是Moore等人于1967年在Roswell Park Memorial Institute研制,针对淋巴细胞培养设计,含BSS+21种氨基酸+维生素11种等。现在已经广泛应用于各种正常细胞和癌细胞的培养,尤其是悬浮细胞的培养,是使用广泛的培养基之一。
        RPMI1640完全培养基制备时需要在无菌室内进行操作,取配培养液专用的2500ml广口立瓶,加入在室温保存的3、天内新蒸馏的双馏水1800ml;加入2袋RPMI1640干粉培养基,轻轻振摇使之分散。不要加热。用5ml枪(枪头需高压灭菌)吸取蒸馏水冲洗包装袋内部,转移全部的痕量干粉到容器内。精确称取4000mg NaHCO3加到容器中。加双蒸水至总体积为1950ml,振摇使溶质充分溶解。用5ml枪(枪头需高压灭菌)取小样测溶液pH值。用已过滤除菌的1N NaOH或1NHC1调节pH值至7.1±0.1。注意缓慢滴加,边滴加边振摇。
        RPMI1640完全培养基使用注意事项:
        1、因RPMI1640中含有的谷氨酰胺半衰期短,只有1~3周,故新配制的培养基使用2周后,再使用时,应临时补加谷氨酰胺。补加办法:
        1)100倍浓缩的谷氨酰胺液使用时加入培养液总体积的1/100。
        2)100倍浓缩谷氨酰胺溶液(200mmol/L)的配制:2.9222g谷氨酰胺,加双馏水至100ml,充分搅拌溶解后,过滤除菌。分装小青瓶(每瓶5~10ml)。-20C贮存。
        2、放入CO2培养箱中的培养瓶,务必将瓶盖旋松(只搭上1扣即可),以使CO2气体能够进入培养瓶中。
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