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      DMEM培养基成分分析实验步骤

      发布时间:2021/7/26 10:15:28      阅读次数:168

        DMEM培养基是一种含各种氨基酸和葡萄糖的培养基,分为高糖和低糖,碳酸氢钠缓冲体系。是在Eagle MEM基础上增加了各成分的用量(加倍),葡萄糖可以选择低糖(1000mg/L)和高糖(4500mg/L),对于生长速度快,附着性差的肿瘤细胞生长有利。特别在附着性较差,但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养时,采用高糖浓度的培养基效果较好,常用于杂交瘤技术中骨髓细胞和DNA转染的转化细胞培养以及疫苗生产和各种初代病毒宿主细胞的细胞培养及单一细胞培养。高糖型有利于细胞停泊于一个位置生长,适于生长较快、附着较困难肿瘤细胞等。
        改良的DMEM培养基是为小鼠成纤维细胞设计的,现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍,维生素浓度是MEM的4倍,采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。
        DMEM培养基成分分析实验步骤:
        1、取清洗干净的500mL大烧杯一个,加入新鲜制备的三蒸水约300mL,加热至15~30℃;
        2、将DMEM干粉袋竖立轻弹,使袋中粉下沉,剪开袋口,将干粉倒入500mL的大烧杯中,用超纯水冲洗袋2~3次;
        3、放入清洗干净的磁子,在磁力搅拌器充分搅拌,以确保培养基干粉充分溶解;
        4、根据配方要求,加入准确称取的NaHCO31.85g,L-谷氨酰胺0.1g,充分摇匀至完全溶解;
        5、加入已经制备好的双抗溶液,使青霉素和链霉素的使用浓度达到100ug/mL;加入培养基总体积约10%的已灭活的小牛血清;
        6、用浓度为7.4%的NaHCO3溶液调整溶液的pH值为7.2~7.4,加超纯水定容,并将培养液转入盐水瓶;用一次性滤器过滤上述培养液到灭菌的盐水瓶,封口,4℃保存备用。
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