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      RPMI1640完全培养基在小鼠脾细胞分离培养中的应用

      发布时间:2021/8/2 10:52:52      阅读次数:146

        RPMI1640完全培养基是丰富的配方,广泛应用于哺乳动物细胞。它们是为人类白血病细胞的悬浮培养或单层培养而配制的。在免疫细胞与肿瘤细胞共培养实验中,由于脾脏是机体免疫器官,含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞,是机体细胞免疫和体液免疫的中心。肿瘤免疫治疗在临床治疗肿瘤过程中显示出的巨大潜力,使其成为肿瘤治疗研究领域的后起之秀,已逐步发展为继手术、放疗和化疗之后的第四大治疗方法。
        小鼠脾细胞的提取分离培养步骤:
        1.C57BL/6小鼠(6~8周)颈椎脱臼处死,迅速放入75%乙醇(v/v)浸泡5分钟,取出,置于超净台内的无菌培养皿中;
        注意:后面所有操作均在超净台内完成,保持无菌操作。
        2.用镊子夹起小鼠腹部皮肤,在小鼠左腹侧中部剪开小口,撕开皮肤,即可见红色长条状脾脏;
        3.用镊子轻轻提起脾脏,用眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏,放入盛有5mLRPMI1640完全培养基的无菌培养皿中;
        4.将脾脏用眼科剪轻轻剪碎后,置于200目的细胞筛网上,用10mL注射器针芯轻轻研压脾脏,挤压完成后,吸取少量RPMI1640培养基冲洗细胞筛网,将脾细胞悬液冲洗至培养皿中;
        注意:此步骤中所用的镊子与步骤3中的镊子分开使用。10mL注射液针芯采用一次性无菌包装的注射器;
        5.用无菌移液管吸取培养皿中的脾细胞悬液,放入50mL无菌离心管中;
        6.4℃条件下300×g离心5min,去上清,加入5mL红细胞裂解液,用移液管轻轻吹打均匀后,室温下裂解2分钟(保持轻轻振。,加入15mLPBS混匀,4℃条件下300×g离心5min后弃上清,用PBS洗2遍,收集细胞,用RPMI1640完全培养基(含10%FBS,下同)重悬细胞;
        7.用RPMI1640完全培养基调整细胞浓度为5.0×106cells/mL,备用。
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