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      RPMI1640完全培养基如何进行细胞复苏?

      发布时间:2021/7/12 13:27:28      阅读次数:125

         RPMI1640完全培养基配制取洁净且经高压灭菌的1000mL容量瓶一个,将一袋RPMI1640(10.4g)倒人其中,量取经高压灭菌的双蒸馏水冲洗包装袋内面三次,并将洗出的液体小心倒入容量瓶中.准确称取碳酸氢钠2.0g,放入容量瓶中.补充双蒸馏水至1000mL,并充分摇动使固体溶解,备用.使用前根据需要用盐酸和氢氧化钠溶液调整pH值.取适量备用的RPMI1640培养基,用盐酸溶液和氢氧化钠溶液调整pH值为7.0.RPMI1640培养基研究了结肠小袋纤毛虫的体外生长特性,以期选择出更为合适的培养方法.

        RPMI1640完全培养基细胞复苏:
        1.把完全培养基放入37°C水浴中预热;
        2.从液氮中取出细胞迅速放入37C水浴快速解冻(解冻后不要继续孵育细胞);
        3.在超净台中加入5ml的完全培养基重悬细胞,1000rpm离心5min;
        4.弃上清,加入5ml的完全培养基重悬细胞,转移到T-25细胞培养瓶中(带滤芯);
        5.将培养瓶置于37℃,5%CO2的无菌培养箱中培养;
        6.第二天,用新鲜的完全培养基给细胞换液.
        RPMI1640完全培养基使用注意事项:
        1.在配制完全培养基前,请把胎牛血清(FBS) 青霉素-链霉素(P/S)放到2-8℃冰箱过夜解冻.
        2.在使用完全培养基前,需要把培养基放到37℃恒温水浴中预热,注意温度不要超过37℃.
        3.请把配制好的完全培养基放在4℃冰箱避光保存,并尽量在一个月内使用完.避免反复冻融,若培养基要分几次使用,请将胎牛血清(FBS) 青霉素-链霉素(P/S)解冻按用量分装后保存.
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