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      DH5α感受态是世界上常用的生物工程菌株之一

      发布时间:2021/7/23 9:39:11      阅读次数:181

        DH5α感受态是世界上常用的生物工程菌株之一,特别是在克隆应用方面.本产品为克隆转化专用的感受态大肠杆菌,该菌株经过特殊方法处理而获得的高活性感受态细胞.使用pUC18(2.7kb)检验可获得高达>10cfu/ug.可用于蓝白斑筛;recA1和endA1的突变有利于克隆DNA的稳定和高纯度的质粒DNA的提;高转化效率,高达8×10^9.
        DH5α感受态操作提示:
        ·刚刚化冻的细胞,转化效率高.化冻后感受态细胞冰浴条件下,半小内活性无明显变化,因此,同时转化多支感受态细胞时尽量半小时加完目的DNA.
        ·感受态细胞应保存在-70℃,避免反复化冻,以避免降低感受态细胞的转化效率.
        ·进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行.
        ·避免用移液枪吹吸,整个过程要轻柔,且尽量低温操作.
        ·为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降低.
        DH5α感受态操作方法(以下操作均按无菌条件的标准进行):
        1.取感受态细胞室温下使其解冻,解冻后立即置冰上;
        2.向感受态细胞中加入目的DNA(含量不超过50ng,体积不超过10ul),轻轻旋转离心管以混匀,冰上放置30分钟;
        3.将离心管置于42℃的水浴中放置60秒(时间需要准确控制).然后快速将离心管转移到冰土,放置5分钟;
        4.向管中加入1ml培养基(不含Amp),混匀后37℃水浴或振荡培养小时,使细菌恢复正常生长状态,并表达质粒编码的抗生素抗性基因(Amp);
        5.将上述菌液涂布于含Amp的筛选平板上(也可经过离心收集后再涂板),正面向上放置半小时,待菌液完全被培养基吸收后倒置培养皿,37℃培养16-24小时.
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