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      BL21感受态细胞操作方法

      发布时间:2021/7/28 9:57:23      阅读次数:135

         BL21感受态是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的化学转化.使用pUC19质粒检测,转化效率可达107,-70℃保存几个月转化效率不发生改变.适合表达非毒性蛋白.该菌株是以T7RNA聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主.T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子调控,该区整合在BL21染色体上.本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化.使用pU19持粒检测,转化效率可达107。

        细胞能够从周围环境中摄取DNA分子,并且不易被细胞内的限制性核酸内切酶分解时所处的一种特殊生理状态称感受态.细菌的感受态有两种类型:一种是自然感受态,自然感受态细菌可以自由地吸收DNA,通过它来进行遗传转化;另一种是人工感受态,在这种转化中,细菌发生改变使得它们能摄入外源DNA。
        BL21感受态细胞操作方法:
        1.取100μl冰上融化的BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL感受态细胞,加入目的质粒并轻轻混匀,冰上静置25分钟,
        2.42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率,
        3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB),混匀后37℃,200rpm复苏60分钟,
        4.5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上,
        5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
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