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      透析胎牛血清其用途可归纳如下

      发布时间:2021/8/4 9:42:19      阅读次数:117

         透析胎牛血清祛除了分子量在1万以下的小分子,如葡萄糖 盐 氨基酸 激素,等.透析过滤去除10KDa以下小分子,避免外源小分子对细胞同位素实验 荧光素酶报告基因检测或转染细胞筛选产生干扰.它也是用于细胞培养,但同时,又有自己的一些特殊应用.其用途可归纳如下:

        细胞水平的药物筛选
        例如:有人要从化合物库中筛选S1P4受体的拮抗剂,以抑制流感病毒带来的免疫激活导致的肺损伤.他采用报告基因进行监测.为了避免细胞培养环境中存在的小分子的干扰,他也需要用10%的透析胎牛血清加McCoy's 5A培养基来培养细胞.类似在药物研发过程中,采用特定启动子操纵的荧光素酶报告基因,基于细胞平台的高通量药物筛选,也都需要无外源小分子的培养体系.
        细胞克隆的筛选
        包括杂交瘤细胞和CHO细胞等,由于在进行细胞筛选时,需要无外源小分子如次黄嘌呤和胸腺嘧啶等的干扰,因此也需要用到透析胎牛血清.
        有人研究呼吸道合胞病毒的宿主特异性:即为什么它只感染呼吸道上皮细胞,而不感染其他细胞.
        他们将该病毒的F蛋白(融合蛋白)序列克隆入质粒内,并转染293T细胞.转染后第20小时,细胞先在不含蛋氨酸和半胱氨酸的DMEM+透析胎牛血清中培养了45分钟(让细胞处于饥饿状态,因培养基中缺少氨基酸),再在同样上述培养基中培养,但添加了35S标记的蛋氨酸和半胱氨酸.
        培养4小时后进行分析.即裂解细胞后,用抗F蛋白的抗体捕获F蛋白 跑胶并进行放射自显影,分析F蛋白的表达情况.发现F蛋白的表达确实增加了,但突变后的F蛋白表达却无任何变化.结果证实,野生型的F蛋白确实参与病毒对宿主细胞的侵袭.
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