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      透析胎牛血清

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       胎牛血清参与细胞培养,是细胞生长天然的培养基,它为细胞提供激素、生长因子、结合蛋白、脂质、矿物质、黏附和铺展因子等来促进体外细胞培养。但是在一些特殊的研究中也会使用到透析胎牛血清,我们来了解下透析胎牛血清的作用。

      透析胎牛血清主要用于可能需要关注小分子浓度的特殊研究。这主要包括四个领域:蛋白质组学、同位素标记、细胞通讯以及报告基因细胞系的筛选,其中有些领域是相互交叉的。以下稍作举例。
      细胞培养条件下稳定同位素标记技术(简称SILAC)。
      这是一项以质谱为基础的定量蛋白质组学技术,全称为Stable isotope labeling with amino acids in cell culture (SILAC)。它将13C或15N标记的氨基酸掺入到培养基中培养细胞,来标记细胞内新合成的蛋白质,一般培养5-6代,细胞中的蛋白质将都被同位素标记。然后质谱分析,即可比较经过不同处理的细胞,其内部蛋白质丰度的变化。它还可用于正常细胞与病理状态细胞二者的比较。为避免胎牛血清中天然氨基酸的干扰,这时就需要用到透析胎牛血清,以保证掺入细胞蛋白中的氨基酸均为标记氨基酸(常采用赖氨酸或精氨酸)。
      工程细胞株的筛选。
      以常见的工程细胞株CHO-DFGRˉ为例,该细胞自身缺乏二氢叶酸还原酶(DHFR),必须在添加了次黄嘌呤、胸腺嘧啶和甘氨酸的培养液中才能得以存活。如将含有目的基因与DHFR基因的质粒转染细胞,则可以得到在不含上述添加剂的培养基上也能生长的细胞克隆。通过甲氨蝶呤(MTX)进一步筛选,可进一步得到能表达大量目的蛋白的细胞克隆。这时的胎牛血清由于不含有次黄嘌呤和胸腺嘧啶等,也常作为选择培养基的一部分,参与阳性转染细胞克隆的筛选。
      研究某些因子如核苷酸或微量元素如硒、锌对某种类型细胞增殖、分化的影响。
       
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